1. CD96 是什么：新興免疫檢查點(diǎn)的研究背景與臨床價(jià)值

免疫檢查點(diǎn)在維持免疫穩(wěn)態(tài)以及治療多種癌癥和自身免疫疾病中具有關(guān)鍵作用。針對(duì) PD-1 和 CTLA-4 等經(jīng)典免疫檢查點(diǎn)的治療，已經(jīng)在臨床上取得顯著成功 ^[1]。在這一背景下，更多新型免疫調(diào)節(jié)分子開(kāi)始受到關(guān)注，其中 TIGIT-CD112R-CD96 軸成為近年來(lái)的重要研究方向 ^[1]。CD96 又稱(chēng) T 細(xì)胞激活和黏附分子（TACTILE），是該軸的重要成員之一，可與 CD155（PVR）結(jié)合，并參與免疫反應(yīng)調(diào)控 ^[1]。

與經(jīng)典免疫檢查點(diǎn)不同，CD96 的功能并非單一抑制，而是具有明顯的復(fù)雜性。在不同細(xì)胞類(lèi)型和不同微環(huán)境中，CD96 既可能提供共刺激信號(hào)，也可能介導(dǎo)共抑制效應(yīng)，從而調(diào)節(jié) T 細(xì)胞和 NK 細(xì)胞的活化、耗竭和效應(yīng)功能 ^[1]。已有研究表明，CD96 在抗原經(jīng)歷性 T 細(xì)胞、腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞以及部分 NK 細(xì)胞群體中表達(dá)升高，并與腫瘤免疫狀態(tài)密切相關(guān) ^[2]。

泛癌種分析進(jìn)一步顯示，CD96 的表達(dá)與預(yù)后之間的關(guān)系具有明顯的腫瘤類(lèi)型依賴(lài)性 ^[3]。例如，在低級(jí)別膠質(zhì)瘤中，CD96 高表達(dá)與較差預(yù)后相關(guān)；而在皮膚黑色素瘤中，CD96 高表達(dá)卻與較好生存結(jié)局相關(guān) ^[3]。這種差異提示，CD96 的臨床意義不能脫離具體癌種和免疫微環(huán)境來(lái)理解。與此同時(shí)，CD96 的表達(dá)還與 CD8+ T 細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK 細(xì)胞和調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞等多種免疫浸潤(rùn)成分密切相關(guān) ^[3]。因此，CD96 已成為值得重點(diǎn)關(guān)注的新型免疫檢查點(diǎn)分子，其分子特征、功能機(jī)制、疾病相關(guān)性及藥物開(kāi)發(fā)進(jìn)展，都具有較高的研究和轉(zhuǎn)化價(jià)值。

2. CD96 的分子結(jié)構(gòu)、表達(dá)特征與細(xì)胞分布

2.1 CD96 蛋白結(jié)構(gòu)與分子特征

CD96 又稱(chēng) Tactile，是一種跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族成員。其分子結(jié)構(gòu)提示其在細(xì)胞識(shí)別、黏附和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中具有重要作用。已有研究嘗試解析 CD96 作為免疫受體的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ) ^[4]，但從目前研究情況來(lái)看，其與配體結(jié)合的精細(xì)結(jié)構(gòu)機(jī)制仍有待進(jìn)一步明確。

2.2 CD96 主要表達(dá)在哪些免疫細(xì)胞

CD96 具有明顯的細(xì)胞類(lèi)型特異性，其表達(dá)常受細(xì)胞活化狀態(tài)及局部微環(huán)境調(diào)控。在 T 細(xì)胞中，CD96 是人類(lèi)淋巴細(xì)胞譜系中的重要表達(dá)分子之一 ^[2]。研究顯示，T 細(xì)胞活化過(guò)程中 CD96 表達(dá)會(huì)發(fā)生動(dòng)態(tài)變化，高表達(dá) CD96 的 T 細(xì)胞通常具有較為特殊的效應(yīng)功能 ^[2]。在腫瘤環(huán)境中，CD96 在抗原經(jīng)歷性 T 細(xì)胞和腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中升高，并與 T 細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)密切相關(guān) ^[2]。

在 NK 細(xì)胞中，CD96 同樣具有重要意義。肝細(xì)胞癌患者腫瘤組織內(nèi) CD96+ NK 細(xì)胞的比例、絕對(duì)數(shù)量及平均熒光強(qiáng)度均明顯升高，并伴隨 CD96、TIGIT 和 CD226 之間與共同配體 CD155 的受體平衡被打破 ^[5]。這些結(jié)果提示，CD96 在腫瘤中的 NK 細(xì)胞調(diào)控中可能發(fā)揮關(guān)鍵作用。

2.3 CD96 在不同生理和病理環(huán)境中的表達(dá)差異

CD96 的表達(dá)不僅存在于腫瘤相關(guān)免疫細(xì)胞中，在特殊生理環(huán)境中也具有明顯特征。例如，在早期妊娠母胎界面，CD96 高表達(dá)于蛻膜自然殺傷細(xì)胞，而 TIGIT 主要表達(dá)于 T 細(xì)胞，CD155 和 CD112 主要分布于間期基質(zhì)細(xì)胞和滋養(yǎng)層細(xì)胞 ^[6]。CD96+ dNK 細(xì)胞通常表現(xiàn)為低細(xì)胞毒性、高黏附性表型，并參與母胎界面的免疫抑制效應(yīng) ^[6]。這說(shuō)明，CD96 的表達(dá)特征與其功能狀態(tài)密切相關(guān)，也是理解其生物學(xué)作用的重要基礎(chǔ)。

3. CD96 信號(hào)通路與作用機(jī)制：配體結(jié)合如何調(diào)控免疫反應(yīng)

3.1 CD96 與配體 CD155 的結(jié)合機(jī)制

CD96 的核心功能主要通過(guò)與配體 CD155（PVR）的結(jié)合介導(dǎo)。研究已明確證實(shí)，CD96 可直接與 CD155 相互作用，這一結(jié)合是其啟動(dòng)下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞功能的關(guān)鍵基礎(chǔ) ^[7]。從結(jié)構(gòu)角度看，CD96 是典型的 I 型跨膜糖蛋白，其胞外區(qū)含有多個(gè) Ig 樣結(jié)構(gòu)域，其中 N 端 IgV 結(jié)構(gòu)域被認(rèn)為是與 CD155 結(jié)合的關(guān)鍵區(qū)域 ^[8]。CD155 同樣屬于 Ig 超家族，其胞外區(qū)由三個(gè) Ig 樣結(jié)構(gòu)域組成，CD96 主要通過(guò)自身 IgV 結(jié)構(gòu)域與 CD155 的 N 端 IgV 結(jié)構(gòu)域相互識(shí)別 ^[8]。

3.2 CD96、TIGIT、CD226 免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)

CD96、TIGIT 和共刺激受體 CD226（DNAM-1）共同構(gòu)成一個(gè)復(fù)雜的免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，它們共享 CD155 和 CD112 等配體，在免疫激活與抑制之間形成動(dòng)態(tài)平衡 ^[1],^[9]。其中，TIGIT 可與 CD155 和 CD112 結(jié)合，CD96 主要與 CD155 結(jié)合，而 CD112R（PVRIG）主要與 CD112 結(jié)合 ^[1]。這些抑制性受體與共刺激受體 CD226 競(jìng)爭(zhēng)相同配體，尤其是 CD155 和 CD112 ^[1],^[10]。因此，受體之間的競(jìng)爭(zhēng)和協(xié)同，共同決定了 T 細(xì)胞和 NK 細(xì)胞的最終功能狀態(tài)。

3.3 CD96 下游信號(hào)通路：MEK-ERK 通路如何傳導(dǎo)信號(hào)

CD96 與配體結(jié)合后可引發(fā)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，這是其發(fā)揮生物學(xué)作用的關(guān)鍵。研究表明，在 CD8+ T 細(xì)胞中，CD96 可發(fā)揮共刺激功能。當(dāng)在人或小鼠 CD8+ T 細(xì)胞表面交聯(lián) CD96 時(shí)，可誘導(dǎo)細(xì)胞活化、效應(yīng)細(xì)胞因子產(chǎn)生以及增殖 ^[11]。這一激活作用主要通過(guò) MEK-ERK 通路傳導(dǎo) ^[11]。通過(guò)該通路，CD96 能促進(jìn) NUR77 和 T-bet 等轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，并增強(qiáng) CD8+ T 細(xì)胞的細(xì)胞毒性效應(yīng)，進(jìn)而影響效應(yīng) T 細(xì)胞分化 ^[11]。

相關(guān)體內(nèi)研究進(jìn)一步表明，無(wú)論是抗體阻斷 CD96 活性還是基因敲除 CD96，均會(huì)損害 CD8+ T 細(xì)胞的活化和效應(yīng)功能 ^[11]。這說(shuō)明，在特定細(xì)胞類(lèi)型中，CD96 并非單純抑制性受體，而可能是 T 細(xì)胞有效應(yīng)答所需的正向調(diào)節(jié)因子。

4. CD96 的雙重功能：為什么既能抑制免疫又能促進(jìn)免疫

4.1 CD96 的免疫抑制作用機(jī)制

CD96 作為重要免疫檢查點(diǎn)分子，在部分背景下表現(xiàn)出明顯的免疫抑制作用，尤其是在腫瘤微環(huán)境中與免疫細(xì)胞耗竭和免疫逃逸密切相關(guān)。

在 NK 細(xì)胞中，這一現(xiàn)象較為典型。肝細(xì)胞癌患者腫瘤組織中 CD96+ NK 細(xì)胞顯著增多，并呈現(xiàn)功能耗竭狀態(tài)，表現(xiàn)為 IFN-γ 和 TNF-α 產(chǎn)生受損，同時(shí) IL-10 和 TGF-β1 等免疫抑制相關(guān)因子表達(dá)升高 ^[5]。這些結(jié)果說(shuō)明，腫瘤微環(huán)境中的高 CD96 表達(dá)可能促使 NK 細(xì)胞失去有效殺傷功能，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。

不過(guò)，CD96 在 NK 細(xì)胞中的抑制作用并非在所有體系中都同樣顯著。針對(duì)擴(kuò)增 NK 細(xì)胞的 CRISPR-Cas9 敲除研究發(fā)現(xiàn)，雖然能夠有效降低 CD96 蛋白表達(dá)，但在體外對(duì)白血病細(xì)胞的抗腫瘤活性并未顯著增強(qiáng) ^[12]。這一結(jié)果提示，單獨(dú)干預(yù) CD96 可能不足以顯著恢復(fù)已擴(kuò)增和激活 NK 細(xì)胞的抗腫瘤能力，說(shuō)明其功能仍受其他受體網(wǎng)絡(luò)和背景因素共同影響。

在 T 細(xì)胞中，CD96 也可表現(xiàn)出抑制作用。雖然其在人類(lèi) T 細(xì)胞中的功能一度存在爭(zhēng)議，但 CRISPR/Cas9 研究表明，敲除 CD96 可增強(qiáng)人 T 細(xì)胞對(duì)白血病細(xì)胞的殺傷能力 ^[13]。進(jìn)一步構(gòu)建包含 HER2 結(jié)合胞外區(qū)、CD96 和 CD3ζ 胞內(nèi)區(qū)的 CAR-T 細(xì)胞，也揭示了 CD96 胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域在抑制 T 細(xì)胞抗腫瘤效應(yīng)中的作用 ^[13]。這些結(jié)果說(shuō)明，CD96 在某些背景下可通過(guò)胞內(nèi)信號(hào)削弱 T 細(xì)胞細(xì)胞毒性，促進(jìn)腫瘤免疫逃逸。

4.2 CD96 的免疫共刺激作用機(jī)制

與上述抑制作用不同，CD96 在 CD8+ T 細(xì)胞中也可發(fā)揮明確的共刺激功能 ^[11]。作為 PVR-nectin 家族成員，CD96 與 TIGIT 和 CD226 共同參與免疫調(diào)控。早期關(guān)于其在 CD8+ T 細(xì)胞中究竟是抑制還是刺激作用并不明確，但后續(xù)研究已證實(shí)，CD96 在 CD8+ T 細(xì)胞上具有增強(qiáng)活化和效應(yīng)反應(yīng)的能力 ^[11]。CD96 交聯(lián)可促進(jìn) CD8+ T 細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子分泌及細(xì)胞毒性分化，并通過(guò) MEK-ERK 通路增強(qiáng) NUR77 和 T-bet 相關(guān)反應(yīng) ^[11]。因此，在 CD8+ T 細(xì)胞語(yǔ)境中，CD96 更接近正向調(diào)節(jié)受體，而非傳統(tǒng)意義上的單向抑制分子。

4.3 CD96 雙重功能的關(guān)鍵決定因素

CD96 的最大特點(diǎn)之一，就是其功能并非固定，而是強(qiáng)烈依賴(lài)于細(xì)胞類(lèi)型和微環(huán)境背景 ^[1]。在 CD8+ T 細(xì)胞中，它可表現(xiàn)為共刺激受體，促進(jìn)活化和效應(yīng)功能；而在腫瘤微環(huán)境中的 NK 細(xì)胞中，它又常與耗竭和抑制表型相關(guān) ^[5],^[11]。此外，CD96 與 TIGIT、CD226 共同競(jìng)爭(zhēng) CD155 和 CD112 配體，這種復(fù)雜的受體-配體網(wǎng)絡(luò)也進(jìn)一步放大了其功能差異 ^[1]。因此，在評(píng)估 CD96 作為治療靶點(diǎn)時(shí)，必須充分考慮其所處細(xì)胞環(huán)境、疾病狀態(tài)及局部免疫背景。

5. CD96 與疾病的關(guān)系：癌癥、自身免疫病、妊娠與病毒感染

5.1 CD96 在癌癥中的作用與臨床意義

5.1.1 CD96 表達(dá)與腫瘤預(yù)后的關(guān)系
CD96 作為新型免疫檢查點(diǎn)分子，在不同腫瘤中的表達(dá)模式和預(yù)后意義具有顯著異質(zhì)性。乳腺癌研究顯示，腫瘤細(xì)胞高表達(dá) CD96 與更高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)相關(guān) ^[9]。在三陰性乳腺癌新輔助化療研究中，CD96 及其相關(guān)軸線分子的表達(dá)也與治療反應(yīng)存在關(guān)聯(lián) ^[11]。在胃癌中，腫瘤內(nèi)高水平 CD96+ 細(xì)胞浸潤(rùn)是預(yù)后不良的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素，并與氟尿嘧啶類(lèi)輔助化療獲益較差相關(guān) ^[14]。在肝細(xì)胞癌中，CD96+ NK 細(xì)胞增加并伴隨功能耗竭，同時(shí) CD96 或 CD155 的高表達(dá)與較短 DFS 和 OS 顯著相關(guān) ^[5]。

與此同時(shí)，泛癌分析顯示 CD96 的臨床意義并非單向一致 ^[3]。在低級(jí)別膠質(zhì)瘤中，CD96 高表達(dá)提示不良預(yù)后；而在黑色素瘤中，其高表達(dá)卻與更佳生存結(jié)局相關(guān) ^[3]。這說(shuō)明 CD96 的預(yù)后價(jià)值具有鮮明的腫瘤背景依賴(lài)性。

5.1.2 CD96 如何影響腫瘤免疫微環(huán)境和治療反應(yīng)
CD96 在腫瘤免疫微環(huán)境中具有重要的負(fù)向調(diào)節(jié)作用，其表達(dá)水平與 T 細(xì)胞和 NK 細(xì)胞的功能狀態(tài)密切相關(guān)。在胃癌中，高 CD96+ 細(xì)胞浸潤(rùn)與 CD8+ T 細(xì)胞耗竭相關(guān)，并形成免疫抑制性腫瘤微環(huán)境 ^[14]。在宮頸癌中，CD96 在腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中同樣與耗竭表型有關(guān) ^[15]。CD96 主要通過(guò)結(jié)合 CD155 抑制 NK 細(xì)胞和 T 細(xì)胞的細(xì)胞毒性功能，并與 DNAM-1、TIGIT 共同構(gòu)成復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò) ^[16]。

值得關(guān)注的是，CD96 還與免疫治療反應(yīng)和耐藥密切相關(guān)。在宮頸癌中，PD-1 阻斷后 CD8+ TILs 上 CD96 進(jìn)一步上調(diào)，提示 CD96 可能參與補(bǔ)償性免疫抑制 ^[15]。研究發(fā)現(xiàn)，阻斷 CD96 可增強(qiáng) PD-1 阻斷在小鼠模型和宮頸癌樣本中的抗腫瘤效果，并改善 CD8+ TIL 功能 ^[15]。這些結(jié)果為 CD96 與 PD-1 聯(lián)合靶向提供了重要依據(jù)。

5.2 CD96 在自身免疫和炎癥性疾病中的作用

CD96 的研究已逐漸拓展至自身免疫和炎癥性疾病領(lǐng)域。在銀屑病樣皮炎模型中，CD96 缺陷小鼠較野生型小鼠表現(xiàn)出更輕的炎癥癥狀，并伴隨真皮 γδ T 細(xì)胞 IL-17A 產(chǎn)生減少 ^[17]。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)表明，CD96 對(duì) γδ T 細(xì)胞的功能調(diào)控在銀屑病樣炎癥中具有直接作用 ^[17]。這一發(fā)現(xiàn)說(shuō)明，CD96 不僅參與腫瘤免疫，也可能介導(dǎo)炎癥性疾病中的關(guān)鍵免疫失衡過(guò)程。

5.3 CD96 在妊娠免疫調(diào)控中的作用

在妊娠早期母胎界面，dNK 細(xì)胞是核心免疫細(xì)胞群，其數(shù)量或功能異常與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)。研究表明，CD96 在母胎界面高度表達(dá)，dNK 細(xì)胞是其主要表達(dá)者；與此同時(shí)，CD155 和 CD112 分布于間質(zhì)細(xì)胞和滋養(yǎng)層細(xì)胞 ^[6]。CD96+ dNK 細(xì)胞呈現(xiàn)低細(xì)胞毒性和高黏附性特征，有助于維持母胎界面的免疫抑制狀態(tài) ^[6]。因此，CD96 可能在維持早期妊娠免疫穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮重要作用。

5.4 CD96 在病毒感染與抗病毒免疫中的作用

CD96 在病毒感染中的作用同樣具有復(fù)雜性。HIV-1 感染研究顯示，在原代 CD4+ T 細(xì)胞中，CD96 表達(dá)明顯下調(diào)，且這一變化受病毒蛋白調(diào)控。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，高表達(dá) CD96 的 CD4+ T 細(xì)胞通常具有促炎性的 TH1/TH17 表型，并表現(xiàn)出更強(qiáng)的 IFN-γ 和 IL-17 分泌能力。此外，CD96 的配體結(jié)合可增強(qiáng)病毒肽刺激后的 IFN-γ 釋放，并促進(jìn) TH1/TH17 相關(guān)因子分泌。這些結(jié)果提示，HIV-1 可能通過(guò)調(diào)控 CD96 表達(dá)來(lái)削弱宿主抗病毒免疫應(yīng)答。與此同時(shí)，CD96 的配體 CD155 也在抗病毒免疫中發(fā)揮重要作用，其表達(dá)受基因毒性應(yīng)激、RAS 激活以及 TLR 相關(guān)通路調(diào)控。