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感受態細胞制備過程中應注意的問題

日期:2009-08-12 15:55:07


1   細菌的生長狀態:實驗中應密切注視細菌的生長狀態和密度,盡量使用對數生長期的細胞(一般通過檢測OD600來控制。DH5?菌株OD6000.5時細胞密度是5×107/ml);

2   所有操作均應在無菌條件和冰上進行;

3   CaCl2處理的細胞,在低溫條件下,一定的時間內轉化率隨時間的推移而增加,24小時達到最高,之后轉化率再下降(這是由于總的活菌數隨時間延長而減少造成的);

4   化合物及無機離子的影響:在Ca2+的基礎上聯合其他二價金屬離子(如Mn2+Co2+)、DMSO或還原劑等物質處理細菌,可使轉化效率大大提高(100-1000倍);

5   所使用的器皿必須干凈。跡量的去污劑或其它化學物質的存在可能大大降低細菌的轉化效率;

6  質粒的大小及構型的影響:用于轉化的應主要是超螺旋的DNA

7  一定范圍內,轉化效率與外源DNA的濃度呈正比;

 



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